Морфология на Salmonella. Род Salmonella - методи за откриване на Salmonella в патологичен материал и продукти. Вземане на материал за изследване

Цел на урока:да изследва основните серотипове на Salmonella и да обоснове необходимостта от тяхната типизация, да разработи методи за биохимична и серологична типизация на Salmonella.

Работен план:

Определете рода на патогените на хранително отравяне, като изследвате културите върху среда с къс пъстър ред и върху тризахарен агар.

Помислете за основните серотипове на Salmonella и обосновете необходимостта от тяхното типизиране.

Извършете биохимична типизация на патогените на Salmonella чрез изучаване на култури върху среди с дълга пъстра серия.

Извършете серологично типизиране на Salmonella, като използвате аглутиниращи серуми на Salmonella.

Помислете за ветеринарно-санитарната оценка на патогени, пренасяни с храни.

Материална подкрепа:среда с инокулации, направени от учениците в предишния урок, 10 епруветки, пипети, предметни стъкла, бактериологична бримка, бактериологичен мост, кисело мляко, газова горелка (алкохол), комплекти диагностични аглутиниращи комплексни и монорецепторни серуми Salmonella, таблици ( „Растеж на патогени на храни, токсични инфекции на дълъг пъстър ред“, „Схема за серологично типизиране на салмонела“, „Състав на първия набор от диагностични серуми за салмонела“), дестилирана вода, разтвор за дезинфекция на ръце, етилов алкохол.

Основни серотипове салмонелаи тяхното практическо значение Понастоящем са известни повече от 2000 серотипа на Salmonella. Най-патогенни за човека и много видове домашни животни са: S. typhi murium, за говедата S. Dublin, S. enteritidis; за свине: S. cholerae suis, S. typhi suis; за птици: S. gallinarum, S. pullorum. Всички горепосочени серотипове на Salmonella са патогенни или условно патогенни за хората. Салмонелите са силно устойчиви на термична обработка и могат да се задържат в месо и други храни дълго време. Освен това трябва да се отбележи, че бактериите от рода Salmonella

имат предимно захаролитични свойства и практически не секретират протеолитични ензими, поради което органолептичното изследване на замърсените продукти обикновено не разкрива видими промени. Тези свойства на Salmonella допринасят за широкото разпространение на това хранително отравяне.

Значение на типизирането на Salmonella и други хранителни патогени

Типизирането на патогени на хранително отравяне е необходимо, за да се установи патогенността на този патоген за хора и други животински видове; за идентифициране на източника на хранително отравяне; да се разработят оптимални методи за лечение на хранителни отравяния и избор на най-ефективните антибиотици и терапевтични серуми; за профилактика на салмонелоза и колибацилоза във фермите и оптимален подбор на ваксини и серуми.

Биохимична типизация на причинителите на хранително отравяне

в сряда дълъг пъстър ред

Биохимичното типизиране се основава на разликите в определени ензими на Salmonella. Поради ензимните различия, някои бактерии са в състояние да разграждат определени въглехидрати или алкохоли, докато други не. За биохимична типизация се използват среди с дълга пъстра серия. За да направите това, е необходимо да се вземе предвид растежа на хранителните патогени на дълъг пъстър ред. Ако изследваният патоген разгражда определена захар, тогава по време на нейното разпадане се отделят различни киселини, pH на средата на His става кисела и индикаторът на Andrede оцветява средата в червено. Ако захарта не се разгради, тогава средата остава жълта и реакцията се счита за отрицателна. След като се вземе предвид реакцията, получените резултати се сравняват с биохимичните свойства на причинителите на хранително отравяне (виж Таблица 5) и чрез метода на елиминиране се идентифицира специфичен серотип на бактерията.

Ако според резултатите от изследването се окаже, че два или повече серотипа на Salmonella имат еднакви биохимични свойства, тогава може да се използва един от следните методи за типизиране на патогена: удължаване на пъстрата серия (повторно засяване върху His среда с тези захари, които се разцепват по различен начин от сравняваните серотипове Salmonella); за извършване на серологични реакции с монорецепторни серуми, реагиращи със сравнявани серотипове Salmonella. Установяването на серотипа на Salmonella може да бъде улеснено чрез логически анализ (епизоотичното състояние на селището, географията на разпространение на сравняваните серотипове, тяхната патогенност за този вид животни).

По подобен начин се извършва биохимично типизиране на бактерии от родовете E. Coli и Proteus (виж Таблица 6).

В допълнение към салмонелата, причинителите на коремен тиф и паратиф А и В, са описани повече от 2400 патогенни серовара на салмонела, които причиняват остър гастроентерит при хора, тифоподобни и септикопиемични форми на заболяването, обединени под името салмонелоза. Основните причинители на салмонелозата са Салмонела серовари enteritidis, typhimurium, choleraesuis, haifa и т.н.

Бактериологичен методе водещ метод в лабораторната диагностика на салмонелозата (схема 10). Най-често салмонелните култури могат да бъдат изолирани от изпражненията на пациентите, малко по-рядко от повърнатото и стомашната промивка, а още по-рядко от кръвта, урината и жлъчката. Изолирането на Salmonella от кръв, костен мозък, гръбначно-мозъчна течност, повръщане и стомашен лаваж потвърждава диагнозата салмонелоза. Носители на салмонела могат да бъдат намерени в изпражненията, урината и жлъчката.

Тестовият материал се инокулира върху плочки с бисмут-сулфитен агар и в акумулиращи среди (магнезий, селенит), от които след 6-10 часа се извършва повторно засяване върху бисмут-сулфитен агар. Културите се отглеждат при температура от 37 0 C, на втория ден се избират черни колонии и се инокулират върху средата Olkenitsky (или Ressel), за да се натрупа чиста култура . На 3-тия ден от изследването, изолираните чисти култури се субкултивират в средата на "пъстрата" серия и RA се поставя с поливалентни и групи (A, B, C, D, E) адсорбирани салмонелни серуми . Ако се получи положителен резултат с една от групите серуми, RA се извършва с адсорбирани O-серуми, характерни за тази група, и след това с монорецепторни H-серуми (неспецифични и специфични фази), за да се определи серогрупата и сероварът на Salmonella в съответствие със схемата на Кауфман-Уайт.

На 4-ия ден от изследването се вземат предвид промените в медиите от „пъстрата“ серия (Таблица 10). Причинителите на салмонелозата са същите като Salmonella paratyphoid B , не ферментират лактоза и захароза, разграждат глюкоза, манитол и малтоза с образуването на киселина и газ, не образуват индол и (с малки изключения) отделят сероводород.

Схема 10. Микробиологична диагностика на салмонелоза.

Биологичен анализ.Материал от пациента произвежда орална инфекция на бели мишки, които умират за 1-2 дни от септицемия. При засяване на кръв от сърцето и материал от вътрешните органи се изолира култура на салмонела.

Серологично изследване -изследване, използващо RNGA на сдвоени кръвни серуми на пациенти, взети на интервали от 7-10 дни с поливалентна салмонела и група (групи A, B, C, D, E) диагностикуми. Увеличаването на титъра на антителата четири или повече пъти има диагностична стойност.

Самостоятелна работа на учениците

Да се ​​проучат основните етапи на бактериологичното изследване на метода за диагностициране на салмонелоза.

1. Отчитане на салмонелни култури върху среда на Левин и Олкеницки (демонстрация).

2. Контрол на чистотата на културата със Salmonella(приготвена е намазка от околната среда на Олкеницки, оцветена е по Грам). Микроскопирайте и нарисувайте демонстрационни микропрепарати на патогените на салмонелоза S. ентерика spp. ентерикасер. enteritidis , тифимурий , choleraesuis .Причинителите на салмонелозата са грам-отрицателни пръчици, идентични по морфология със заоблени краища.

3. Идентифициране на изолираната патогенна култура:

- чрез антигенни свойства- отчитане на приблизителната реакция на аглутинация върху стъкло с диагностични монорецептори на салмонела, аглутиниращи O- и H серуми в съответствие със схемата на Kaufman-White;

- по биохимични свойства- определяне на биохимичната активност на изследваната култура според "пъстрата" серия на Giss или Peshkov (демонстрация). Обърнете внимание на разграждането на глюкозата, липсата на разграждане на лактозата и захарозата.

- чрез фаголизируемост(отчитане на проба с фаг - демонстрация)

4. Определяне на чувствителността на изолираната култура към антибиотици по метода на хартиения диск(демонстрация).

Повече от 2000 различни бактерии, които причиняват заболявания при хора и животни, принадлежат към този род от семейство Enterobacteriaceae. Тези заболявания се наричат ​​салмонелоза. Салмонелите са сходни по морфологични, културни и ензимни свойства, но се различават по антигенна структура.

Салмонелата се разделя на монопатогенна и полипатогенна. Първите включват причинители на коремен тиф, паратиф А и паратиф Б. Само хората страдат от тези заболявания. Втората група включва патогени, които засягат хора и животни.

S. typhi са открити за първи път от Ebert (1880) в органите на човек, починал от коремен тиф. Ashar и Bansod (1886) при заболявания, подобни на коремен тиф, изолирани от гной и урина на пациенти с бактерии, които се различават по биохимични и серологични свойства от причинителите на коремен тиф. Те се наричат ​​S. paratyphi A и S. paratyphi B. Почти едновременно с това американският учен Д. Салмон (1885) за първи път описва причинителите на холерата по свинете (S. choleraesuis). Впоследствие са описани много подобни бактерии, обединени в рода Salmonella, кръстен на учения, който ги е описал.

Морфология. Всички Salmonella са малки, 1,0-3,0 × 0,6-0,8 µm пръчици със заоблени краища. Грам-отрицателни. Подвижен, перитрихичен. Спори и капсули не се образуват.

отглеждане. Salmonella са факултативни анаероби. Не са взискателни към хранителните среди. Те се развиват добре върху MPA и MPB при 37°C (от 20 до 40°C) и pH 7,2-7,4 (от 5,0 до 8,0). Върху МРА те образуват нежни, полупрозрачни, леко изпъкнали, лъскави колонии, върху МРА - равномерна мътност.

По време на първоначалното засяване на материал от пациенти (изпражнения, урина, повръщане, кръв, жлъчка) често се отбелязва бавен растеж на Salmonella. За тяхното натрупване се извършва засяване върху обогатителни среди: селенитен бульон, среда на Мюлер, среда на Кауфман. Използват се и елективни (селективни) среди: жлъчка (10-20%) и среда на Rappoport.

На диференциално диагностичните среди на Endo, EMS, Ploskirev, Salmonella растат под формата на безцветни колонии, тъй като не разграждат лактозата, която е част от средата. Върху бисмут-сулфитен агар след 48 часа те образуват черни колонии, оставяйки следа след отстраняването им с примка (с изключение на Salmonella paratyphoid A).

При прясно изолирани култури от S. paratyphi B, след инкубиране в термостат за 18-20 часа и задържане на стайна температура за 1-2 дни, по периферията на колонията се образува мукозна стена.

Ензимни свойства. Салмонелата разгражда глюкоза, манитол, малтоза с образуването на киселина и газ. Изключение правят причинителите на коремен тиф (S. typhi), които разграждат тези захари само до киселина. Салмонелата не ферментира лактоза и захароза. Протеолитични свойства: повечето Salmonella разграждат протеиновата среда с образуването на сероводород (причинителите на паратиф А се отличават с липсата на това свойство). Индол не се образува. Желатинът не е втечнен.

Токсигенност. Salmonella съдържа ендотоксин - липополизахаридно-белтъчен комплекс.

Антигенна структура и класификация. Още в началото на 20 век учените забелязват различното естество на антигените на Salmonella. Kaufman (1934), въз основа на резултатите от реакцията на аглутинация на различни Salmonella с набор от серуми, разделя всички Salmonella на групи и типове и предлага диагностична схема за тяхната антигенна структура. В съответствие с тази схема в момента се идентифицира салмонела.

Salmonella съдържа два антигенни комплекса: О и Н, О-антиген - липополизахарид-протеинов комплекс; той е термостабилен, инактивиран от действието на формалина. Н-антигенът е свързан с флагели, има протеинова природа; той е термолабилен, инактивиран от алкохол и фенол, но устойчив на формалин.

Всички Salmonella са разделени на О-групи, всяка от които се характеризира с наличието на определени О-антигени: основният, обозначен с арабска цифра (2, 4, 7, 8, 9 и т.н.), и допълнителните общи за няколко O-групи ( 1, 12). Понастоящем са известни повече от 60 O-групи, обозначени с главни букви на латинската азбука (A, B, C, D, E и др.).

S. typhi също съдържа Vi-антиген, който е разположен в микробната клетка по-повърхностно от О-антигена и предотвратява аглутинацията на културата с О-серум. Този антиген е термолабилен. Наличието му се свързва с вирулентността на патогена. Vi антигенът също се съдържа в клетките на S. paratyphi C.

Н-антигените на салмонела имат две фази. Salmonella от различни сероварианти на една и съща O-група имат различна първа фаза на H-антигена, която се обозначава с малки букви на латинската азбука: a, b, c, d, eh ... u, z и т.н. Втората фаза на Н-антигена обикновено се обозначава с арабски цифри: 1, 2, 5, 6, 7 и малки латински букви. Комбинацията от различни О- и Н-антигени определя антигенната структура на културите и тяхното име.

В практическата работа за определяне на антигенната структура на Salmonella се използват адсорбирани монорецепторни аглутиниращи серуми, които съдържат антитела към един антиген. Поставете реакцията на аглутинация върху стъклото и наличието на аглутинация с определени серуми характеризира антигенната структура на избраната култура. Например, културата се аглутинира с О-серуми "9" и "12" и Н-серум "d"; намерете в схемата серовар с такъв антигенен състав (S. typhi), поставете допълнителна реакция с Vi-серум

Има комплекти от специфични фаги на Salmonella, които лизират само Salmonella на съответния фаг. За определяне на фаговара на S. typhi култури, съдържащи Vi антигена, у нас се произвеждат 45 фага; за S. paratyphi B-11 фаги; S. paratyphi A - 6 и др. Тези изследвания се провеждат за определяне на източника и пътя на предаване на инфекцията.

Устойчивост на фактори на околната среда. Салмонелата е доста устойчива. При температура 100 ° C те умират мигновено, при 60-70 ° C - за 10-15 минути. Те понасят добре ниски температури, могат да се съхраняват в чиста вода и лед в продължение на няколко месеца; в пушено и осолено месо - до 2 месеца. Устойчив на изсъхване, дълготраен на прах.

Под действието на дезинфектанти загиват за няколко минути (2-5% разтвор на фенол, 1:1000 разтвор на сублимат, 3-10% разтвор на хлорамин).

Възприемчивост на животните. Повечето салмонели причиняват заболявания при хората и много видове животни и птици (полипатогенни).

Коремен тиф, паратиф А и Б

Източник на инфекция. Болен човек и бактерионосител.

Пътища на предаване. Инфекциозните агенти се предават чрез предмети, замърсени с човешки секрети, чрез ръцете, водата, храната. Често патогените се пренасят от мухи. В зависимост от начините на предаване се разграничават битови, водни, хранителни огнища на коремен тиф и паратиф.

Патогенеза. Заразяването става през устата. От устната кухина микроорганизмите навлизат в стомаха, където се унищожават частично под въздействието на стомашния сок и ензимите. Останалите салмонели навлизат в тънките черва, проникват в лимфоидната тъкан на тънките черва (групови лимфни и единични фоликули), в които се размножават по време на инкубационния период (10-14 дни). До края на този период патогените навлизат в лимфата и кръвта (бактериемия) и се разпространяват в тялото. През този период те се локализират в лимфоидната тъкан на вътрешните органи, макрофагалната система, черния дроб, далака и костния мозък. Салмонелата се натрупва в жлъчния мехур, където намира благоприятни условия за размножаване, тъй като жлъчката е добра среда за размножаване на тези бактерии. В същото време те отново навлизат в тънките черва и, засягайки вече сенсибилизираната лимфоидна тъкан (групови лимфни и единични фоликули), причиняват образуването на специфични коремен тиф (фиг. 42).

По време на периода на бактериемия част от микроорганизмите се унищожават, докато се освобождава ендотоксин и настъпва интоксикация: температурата се повишава, появяват се общо неразположение, слабост, главоболие и др., урина, слюнка и др.

Периодът на реконвалесценция (възстановяване) се характеризира с прочистване на организма от патогена, повишена фагоцитна активност на клетките и натрупване на антитела в кръвта.

Въпреки това, при коремен тиф и паратиф, бактериалната екскреция често не завършва с възстановяването на пациента - образува се бактерионосител. Хроничните възпалителни явления в жлъчния мехур допринасят за оцеляването на Salmonella в жлъчката и тяхното дълготрайно отделяне от тялото (понякога до няколко години).

Имунитет. Постинфекциозният имунитет е доста напрегнат и дълъг. Рецидивите са редки. По време на заболяването се произвеждат антитела: в края на 1-вата седмица се появяват аглутинини, преципитини и други видове антитела. Броят им се увеличава, достигайки максимум на 14-15-ия ден от заболяването. Антителата остават в кръвния серум на болния за дълго време.

Активността на фагоцитите и други клетъчни защитни фактори също са важни за формирането на имунното състояние на организма.

Предотвратяване. Спазване на личната хигиена и провеждане на всички санитарно-хигиенни мерки: надзор на водоизточниците, контрол на храните и заведенията за обществено хранене.

Специфична профилактика. Химическа ваксина, съдържаща пълни антигени на патогени на коремен тиф, паратиф А и В и тетаничен токсоид (TAB "te). Има и ваксина срещу тифен алкохол, обогатена с Vi антигена, чието въвеждане за профилактични цели има добър ефект. В фокус на заболяването, хората, които са били в контакт с пациенти, получават тифен бактериофаг.

Лечение. Антибиотици: хлорамфеникол, тетрациклин и др.

Хранително отравяне

При консумация на храни, заразени със Salmonella от различни серовари (с изключение на S. typhi, S. paratyphi A и B), възникват хранителни токсични инфекции.

Източници на инфекция. Животни и птици, болни от салмонелоза или здрави, в тялото на които, без да ги уврежда, има салмонела.

Пътища на предаване. Заразяването става при консумация на месо, месни продукти, яйца, мляко, млечни продукти, заразени със салмонела. Най-опасно е използването на храни, в които се случва размножаването и смъртта на салмонелата и натрупването на ендотоксин.

Патогенеза. Веднъж попаднали в тялото през устата, салмонелата прониква в храносмилателния тракт. В същото време значителна част от бактериите умират и се освобождава ендотоксин, който може да проникне в кръвта. Има симптоми на увреждане на стомашно-чревния тракт и обща токсикоза. Заболяването продължава не повече от 4-5 дни; понякога тези, които са били болни, стават носители на салмонела.

Имунитеткъс. В кръвта на пациентите и реконвалесцентите се натрупват различни антитела: аглутинини, преципитини и др. Има много серовари на Salmonella и имунитетът е специфичен, т.е. насочен само срещу един патоген, така че човек може да се разболее отново от салмонелоза.

Предотвратяване. Постоянен строг ветеринарно-санитарен контрол върху добитъка, клане и разфасоване на трупове, съхранение и преработка на месо и месни продукти. Необходимо е стриктно спазване на санитарно-хигиенния режим и личната хигиена в заведенията за обществено хранене.

Специфична профилактика. Хората, които са в огнищата на хранително отравяне, трябва да получат поливалентен бактериофаг от салмонела.

Лечение. Основният терапевтичен агент е детоксикация на тялото - въвеждане на голямо количество течност, стомашна промивка. Използват се и антибиотици.

Нозокомиална салмонелна инфекция

Причинителят на нозокомиалната салмонелна инфекция най-често е S. typhimurim. Има и "болнични" огнища, причинени от S. heidelberg, S. derby и др. Въпреки че морфологичните и културните свойства на тези патогени не се различават от тези на другите Salmonella, има някои биологични характеристики, характерни за тях. Така например, патогените на нозокомиалните инфекции принадлежат към определени биовари, те са по-патогенни за бели мишки и т.н.

Източници на инфекция. По-често бактерионосител, по-рядко болен.

Пътища на предаване. Преобладават индиректните контакти (играчки, бельо, предмети за грижа за пациента). По-рядко се срещат въздушно-капков и хранителен път на предаване.

Патогенеза. Заболяването се развива на фона на отслабване на тялото и намаляване на неговата имунна активност. Патогенът навлиза в тялото орално или през дихателните пътища, което определя развитието на патологичния процес: дисфункция на стомашно-чревния тракт с дехидратация или увреждане на дихателната система, бактериемия, септични усложнения. На първо място се разболяват малки деца.

Имунитет. Произвежда се само по отношение на един серовар на Salmonella.

Предотвратяване. Стриктно спазване на санитарно-хигиенния режим в лечебните заведения.

Специфична профилактика. При нозокомиална салмонелна инфекция на децата, които са били в контакт с болния, трябва да се даде поливалентен бактериофаг от салмонела.

Лечение. Симптоматично.

Контролни въпроси

1. Какви са морфологичните, културните и ензимните свойства на Salmonella?

2. На какво се основава класификацията на Salmonella?

3. Какви заболявания причинява салмонела?

Микробиологични изследвания

Целта на изследването: изолиране на патогени и определяне на серовара на Salmonella.

Изследователски материал

2. Движение на червата.

4. Дуоденално съдържимо.

В зависимост от стадия на заболяването се изследват различни материали.

Съдържанието на розеола, костен мозък, храчки и материалът, получен при аутопсията - части от органи, също могат да бъдат подложени на изследване.

В случай на токсични инфекции, стомашна промивка, повръщане, хранителни остатъци могат да послужат като материал за изследване.

Независимо от естеството на материала, взет за изследването, от момента на изолиране на чистата култура изследването се извършва съгласно общата схема.

Основни методи на изследване

1. Бактериологичен (фиг. 43).

2. Серологични.

Напредък на изследванията

Втори ден на изследване

Извадете чашите от термостата (инкубация 18-24 часа) и вижте порасналите колонии с невъоръжено око и с лупа. Няколко (5-6) подозрителни колонии се изолират върху средата на Olkenitsky или Russell. Засяването се извършва по следния начин: отстранената колония се вкарва внимателно, без да се докосват ръбовете на епруветката, в кондензационната течност, след което цялата наклонена повърхност на средата се инокулира с удари и се инжектира в дълбочината на епруветката. колона за откриване на образуване на газ. Инжектирането трябва да се направи в центъра на колоната с агар.

Епруветките с култури се поставят в термостат. Ако тестовият материал е бил засят върху обогатяващата среда, тогава след 18-24 часа обогатяващата среда се засява върху плочи с диференциална среда. По-нататъшното изследване се извършва съгласно общата схема.

1 (На мястото на отстранените колонии остава черна следа (цветът на средата се променя).)

Трети ден изследвания

Извадете епруветките с култури от термостата и вижте естеството на растежа.

Комбинираната среда съдържа лактоза, глюкоза, понякога урея и индикатор. Разграждането на глюкозата става само при условия на анаеробиоза. Следователно наклонената повърхност на средата не се променя по време на разграждането на глюкозата и колоната се превръща в цвят, съответстващ на индикатора. Бактериите, които разграждат лактозата и уреята, променят цвета на цялата среда.

Ако изолираните култури ферментират лактоза или разграждат уреята, променяйки цвета на цялата среда, тогава те не са Salmonella и може да се даде отрицателен отговор.

Култура, която разгражда само глюкозата, се подлага на по-нататъшно изследване: правят се петна, оцветяват се по Грам и се микроскопират. Ако в намазките има грам-отрицателни пръчици, се изследва тяхната подвижност и ензимни свойства.

Подвижността може да се определи във висяща капка или натрошена капка и чрез модел на растеж в полутечна среда на Hiss или 0,2% агар. При наличие на подвижност при засяване чрез инжектиране, растежът върху средата е дифузен, средата става мътна.

За откриване на ензимна активност се извършва инокулация върху среда на Hiss, MPB, пептонна вода. Индикаторните хартии се спускат (под тапата) в епруветки с последната среда за определяне на индол и сероводород. Направете и сеитба върху лакмусово мляко.

Четвърти ден на изследване

Биохимичната активност се взема предвид в зависимост от резултата от ферментацията на въглехидрати и други среди (виж таблица 33).

Забележка. до - образуване на киселина; kg - образуване на киселина и газ; u - алкализация; + наличие на собственост; - липса на имущество.

След като се определят морфологичните, културните и ензимните свойства на изолираната култура, е необходимо да се анализира антигенната структура (Таблица 34).

Серологичната идентификация на Salmonella започва с тест за аглутинация върху стъкло с поливалентен O-серум A, B, C, D, E. При липса на аглутинация изолираната култура се тества с поливалентен O-серум за редки групи Salmonella. При положителна реакция с един от серумите културата се тества с всеки О-серум, който е част от поливалентния, за определяне на О-серогрупата. След като се установи, че културата принадлежи към О-групата, нейните Н-антигени се определят със серуми на първата, а след това на втората фаза (Таблица 35).

Културата от коремен тиф на Salmonella също се тества с Vi-серум. Причинителите на коремен тиф, съдържащи Vi-антиген, се изследват с Vi-фаги (има 86 от тях). Определянето на фаговия тип е от голямо епидемиологично значение (виж Фиг. 43).

Техника на фагово типизиране. 1-ви метод. 20-25 ml агар се изсипват в петриеви панички и се сушат с отворени капаци в термостат. Дъното на чашата е разделено на сектори. На всеки сектор е изписано името на фага. Изследва се 4-6 часова бульонна култура, тъй като съдържа повече Vi антиген. 8-10 капки бульонна култура се нанасят върху повърхността на агара и се втриват върху повърхността на агара със стъклена шпатула. Чаши с култури се сушат с отворени капаци в термостат. Във всеки сектор се прилага капка от съответния типичен фаг. След изсъхване на капките чашите се поставят в термостат за 18-24 ч. Резултатът се отчита с просто око или с лупа през дъното на чашата.

Наличието на лизис на културата от един или няколко типични фаги дава възможност да се определи дали изолираният щам принадлежи към конкретен вид фаги.

2-ри метод. Културата се нанася на капки върху хранителната среда. След изсушаване на културата в термостат, капка типичен фаг се прилага към всяка капка. Поставете термостат.

Степента на лизис се изразява чрез системата с четири кръста.

Контролни въпроси

1. Какъв материал се изследва за коремен тиф, паратиф и токсични инфекции?

2. В какъв период на заболяването се използва методът за изолиране на хемокултура?

3. В какъв период от заболяването с коремен тиф и паратиф се изследват изпражненията и урината?

4. Върху какви среди за диференциална диагностика се посява изследваният материал?

5. Какви среди се използват за натрупване на Salmonella?

6. Какво се определя от монорецепторните O-серуми и какво от монорецепторните H-серуми?

1. Проучете по таблицата. 32 естеството на растежа на Salmonella върху различни среди. Погледнете чашите на учителя с инокулация на коремен тиф Salmonella върху среда Endo, Ploskirev, бисмут-сулфитен агар. Скицирайте колониите с цветни моливи и покажете на учителя.

2. Вземете култура от Salmonella, О- и Н-монорепторни серуми от учителя. Поставете реакцията на аглутинация върху стъклото. Обмислете реакцията и покажете на учителя.

Изолираната култура даде положителен тест за аглутинация с О-серум 4. Какви Н-серуми трябва да бъдат тествани с аглутинация, ако смятате, че това е култура на Salmonella paratyphoid B?

Серологична диагностика на коремен тиф и паратиф

Реакция на Видал. От втората седмица на заболяването в кръвта на пациентите се натрупват антитела срещу инфекциозния агент. За да ги идентифицирате, кръвният серум на пациента се изследва в реакцията на аглутинация. Като антиген се използват убити салмонелни култури - диагностикуми.

За установяване на реакцията на Vidal се използва серум на пациента, набор от диагностични комплекти и изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Кръв (2-3 ml) от пулпата на пръста или кубиталната вена се събира в стерилна епруветка и се доставя в лабораторията. В лабораторията епруветката се поставя в термостат за 20-30 минути, за да се образува съсирек, след това съсирекът се обикаля с пастьорска пипета, за да се отдели от стената на епруветката, и се поставя на студено за 30- 40 минути. Отделеният серум се изсмуква и се използва за поставяне на реакция на аглутинация с диагностикуми от салмонела тиф и паратиф. За да се получи серум, кръвта може да се центрофугира.

При възникване на инфекциозен процес - коремен тиф или паратиф - в организма се образуват О- и Н-антитела към едноименните антигени на патогена.

О-антителата се появяват първи и изчезват доста бързо. H-антителата персистират дълго време. Същото се случва по време на ваксинация, следователно положителна реакция на Видал с О- и Н-антигени показва наличието на заболяване, а реакция само с Н-антигени може да бъде както при тези, които са били болни (анамнестична реакция), така и при тези, които са били ваксинирани (ваксинация). Въз основа на това реакцията на Видал се поставя отделно с О- и Н-антигени (диагностикуми).

Тъй като клинично коремният тиф и паратифът А и В са подобни, за да се идентифицира естеството на заболяването, серумът на пациента се тества едновременно с диагностикуми от салмонела тиф и паратиф А и В.

Реакцията на Видал е широко използвана, тъй като е проста и не изисква специални условия.

Има два начина за настройка на реакцията: капка и обем (вижте Глава 12). В практиката по-често се използва обемният метод. При настройване на реакция на линейна аглутинация броят на редовете трябва да съответства на броя на антигените (diagnosticum). Причинителят на заболяването се счита за микроорганизъм, диагностикумът от който е аглутиниран от серума на пациента. Понякога се отбелязва групова аглутинация, тъй като причинителите на коремен тиф и паратиф имат общи групови антигени. В този случай резултатът от реакцията в серията, в която се отбелязва аглутинация при по-голямо разреждане на серум, се счита за положителен (Таблица 36).

Забележка. На практика реакцията на Видал се поставя с четири диагностикума: коремен тиф "О" и "Н", а паратиф А и В - с диагностикум "ОН".

Ако аглутинацията се проявява само при малки разреждания на серума - 1:100, 1:200, тогава, за да се разграничи реакцията в случай на заболяване от ваксинация или анамнеза, те прибягват до повторно поставяне на реакцията на аглутинация след 5-7 дни. При пациент титърът на антителата се повишава, но при ваксиниран или възстановен пациент не се променя. По този начин повишаването на титъра на антителата в кръвния серум служи като индикатор за заболяването.

Vi-аглутинините се появяват в кръвта на пациента в отговор на въвеждането в тялото на патогени на тиф, притежаващи Vi-антигена. Те се определят от 2-та седмица на заболяването, но титърът им обикновено не надвишава 1:10. Откриването на Vi-антитела е свързано с наличието на патогени на коремен тиф в организма; следователно определянето на тези антитела е от голямо епидемиологично значение, тъй като позволява идентифицирането на бактериални носители.

Vi-реакция на хемаглутинация. Това е най-чувствителната реакция за откриване на антитела.

Принципът на реакцията е, че човешките (група I) или овчи еритроцити след специална обработка могат да адсорбират Vi-антигена на повърхността си и да придобият способността да аглутинират със съответните Vi-антитела.

Еритроцитите с адсорбирани на повърхността антигени се наричат ​​еритроцитни диагностикуми.

За да настроите реакцията на Vi-хемаглутинация, вземете:

1) кръвен серум на пациента (1-2 ml); 2) еритроцитна Salmonella Vi diagnosticum; H) Vi-серум; 4) О-серум; 5) изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Реакционната смес се поставя в епруветки за аглутинация или в пластмасови плаки с ямки.

Взема се кръв от пациента по същия начин, както при реакцията на Vidal. Вземете серума. Двукратни серийни разреждания се приготвят от серум, започвайки от 1:10 до 1:160.

0,5 ml от всяко разреждане се добавят към ямката и се добавят 0,25 ml еритроцитен диагностикум. Реакцията се поставя в обем от 0,75 ml.

Контролите са: 1) стандартен аглутиниращ монорецепторен серум + диагностикум - реакцията трябва да е положителна до серумния титър; 2) диагностикум в изотоничен разтвор на натриев хлорид (контрола) - реакцията трябва да е отрицателна.

Съдържанието на ямките се смесва старателно, поставя се в термостат за 2 часа и се оставя на стайна температура до следващия ден (за 18-24 часа).

Счетоводството започва с контрол. Реакцията се оценява в зависимост от степента на аглутинация на диагностикума.

Резултатите се вземат предвид по системата с четири кръста:

Еритроцитите са напълно аглутинирани - утайка на дъното на дупката под формата на "чадър";

+++ "чадърът" е по-малък, не всички еритроцити са аглутинирани;

++ "чадър" е малък, на дъното на дупката има утайка от неаглутинирани еритроцити;

Реакцията е отрицателна; еритроцитите не аглутинират и се утаяват на дъното на ямката под формата на копче.

Контролни въпроси

1. В кой период на заболяването се диагностицира реакцията на Видал?

2. Какви съставки са необходими за осъществяване на реакцията на Видал?

3. Какви диагностикуми се използват за реакцията на Видал?

4. Коя от серологичните реакции е най-чувствителна при диагностицирането на коремен тиф и паратиф?

5. Какъв диагностикум се използва при формулирането на реакцията на Vi-хемаглутинация?

6. Какъв серум се използва за определяне на наличието на Vi-антиген в изследваната култура?

7. Какво е значението на определението за Vi-фагов тип?

Вземете от учителя О- и Н-диагностикуми от салмонела тиф, паратиф А и паратиф В и серум на пациента. Поставете реакцията на Видал.

Хранителни среди

Среди EMS, Ploskirev, бисмут-сулфитен агар се произвеждат от медицинската индустрия под формата на сух прах. Приготвят се според указанията на етикета: претегля се определено количество прах, налива се подходящото количество вода, кипва се и се изсипва в стерилни петриеви панички.

Уензди Ръсел. В 950 ml дестилирана вода се добавят 40 g суха хранителна среда и се добавят 5 g хранителен агар. Загрейте до кипене и разтваряне на праховете. Разтворете 1 g х в 50 ml дестилирана вода. ч. глюкоза и се добавя към готовата смес. Средата се налива в стерилни епруветки от 5-7 ml, стерилизира се с течаща пара (2 дни по 2 минути) и се скосява така, че да остане колона. По същия начин се приготвя среда на Ръсел с манитол и захароза.

Среда на Olkenitsky от сух агар. 2,5 g сух хранителен агар се разтопяват в 100 ml дестилирана вода. Всички съставки, посочени в рецептата (етикет), се добавят към охладения до 50 ° C агар. Средата, излята в епруветки, се стерилизира с течаща пара (3 дни за 20 минути) и след това се скосява. Готовата среда трябва да е бледорозов цвят.

№ 2 Причинители на Salmonella. Таксономия. Особеност. Микробиологична диагностика на салмонелоза. Лечение.
Остра чревна зоонозна инфекция, причинена от серовари на Salmonella, характеризираща се с лезии на стомашно-чревния тракт.
Морфологични свойства:мобилен, грам "-" стикове, без капсули. Те растат добре върху прости хранителни и жлъчни среди. На плътни те образуват колонии в R- и S-форми, на течни - мътност. Върху храни, съдържащи лактоза, образуват безцветни колонии.
Биохимична активност:бъг ферментация. към киселина и газ, без ферментация на лактоза, производство на сероводород, без образуване на индол.
Антигенна структура: соматичен О-антиген, флагеларен Н-антиген, Някои - К-антиген. Род Салмонеласе състои от два вида – вид С.ентерика,което включва всички салмонели, които са патогени за хората и топлокръвните животни, и вида С.бонгори,който е подразделен на 10 серовара.
Преглед С.ентерикаразделен на 6 подвида, които се подразделят на серовари. Някои серовари на Salmonella, по-специално S. typhi, имат полизахарид Vi антиген, който е вид К антиген.
Епидемиология. Причинителите на салмонелозата са голяма група Salmonella, която е част от подвида ентерика. Най-честите причинители на салмонелозата при хората са серовари S. Typhimurium, S. Dublin, S. Choleraesuis. Основните фактори на предаване са месо, мляко, яйца, вода.
Патогенеза и клиника.Заболяването протича в локална форма на гастроентерит, водещият синдром е диарията. Нахлувайки в лигавицата на тънките черва чрез М-клетки и прониквайки в субмукозата, салмонелите се улавят от макрофагите, пренасяйки се от тях в пейеровите петна, където образуват първичното огнище на инфекцията. В този случай се освобождават ендотоксин и протеинов ентеротоксин. Ентеротоксинът активира навлизането в чревния лумен на голямо количество течност, K, Na. Диария, повръщане.
Имунитет: Нестресиран, серовар-специфичен, секреторен IgA медииран, който предотвратява проникването на Salmonella през лигавицата на тънките черва. Антителата могат да бъдат открити в кръвта.
Микробиологична диагностика. Бактериологичното изследване се подлага на повръщане, стомашна промивка, изпражнения, жлъчка, урина, кръв. При идентифициране на изолирани култури е необходим широк набор от диагностични О- и Н-серуми.
За серологични изследвания се използват RNGA, ELISA. Важна диагностична стойност е повишаването на титъра на антителата в динамиката на заболяването.
Лечение. Използва се патогенетична терапия, насочена към нормализиране на водно-солевия метаболизъм. При генерализирани форми - етиотропна антибиотична терапия.
Salmonella група, адсорбирани О- и Н-аглутиниращи серуми.Те се използват за установяване на серогрупи и серовари на Salmonella в реакцията на аглутинация.
Salmonella O- и H-монодиагностикумиса суспензии от Salmonella, убити чрез нагряване (O-diagnosticum) или обработка с формалин (H-diagnosticum). Те се използват за серодиагностика на коремен тиф.
Предотвратяване . Специфична профилактика на салмонелоза при селскостопански животни и птици. Неспецифична профилактика - провеждане на ветеринарно-санитарни мерки.

Съдържание на темата "Шигела. Дизентерия. Салмонела. Салмонелоза.":

Морфология на Salmonella. Културни свойства на Salmonella. Биохимични признаци на салмонела.

Род SalmonellaПредставлява малки продълговати бактерии със заоблени краища с размери 0,7-1,5x2-5 µm. Бактериите нямат капсули.

Повечето изолати на салмонелаподвижни (перитрихни), но има неподвижни мутанти и серовари. хемоорганотрофи, оксидаза-отрицателни, каталаза-положителни.

Температурен оптимум Salmonellaе 35-37 ° C, оптималното рН е 7,2-7,4. растеж на салмонелапотискат или ограничават високи концентрации на натриев хлорид и захар. Върху хранителни среди Salmonella образува малки (2-4 mm) прозрачни S-колонии, типични за повечето ентеробактерии. Те също така образуват груби и сухи R-колонии. На Ендо агар S-колониите са розови и прозрачни, на Плбскирев агар са безцветни и изглеждат по-плътни и мътни, на бисмут-сулфитен агар са черно-кафяви, с метален блясък, заобиколени от черен ореол, средата под колониите стават черни. Изключение правят S. paratyphi A, S. choleraesuis и някои други, които образуват кафяво-зеленикави колонии върху бисмут-сулфитен агар (фиг. 25, виж цветната вложка). В бульона S-формите дават равномерна мътност на средата; R-форми - седимент.

Биохимични признаци на салмонела

Биохимични признаци на салмонеласа представени в таблицата по-долу. Характерните свойства на Salmonella са образуването на H 2 S и липсата на образуване на индол (с изключение на някои серовари).